Po předání 464.101 BMB-ČMD dne 21. listopadu 1940 byla přidělena do výtopny Masarykovo nádraží. Zde, spolu s 464.102, setrvala až do 7. července 1948, kdy byly ve stejný den obě 464.1 předány do Brna. Využívány byly na trati do Jihlavy, kam nakonec po předání některých výkonů odešly v květnu 1949. Spolu s řadou 464.0 byly obě "jedničky" nasazovány v čele osobních vlaků a rychlíků na trati do Brna, Znojma, ale i do Prahy - Těšnova. S příchodem druhé lokomotivy 464.201 do depa Jihlava, v roce 1959, jsou spolu nasazeny v rychlíkovém pětidenním turnusu do Prahy. Teprve příchod strojů 477.059 a 477.060 umožnilo vytvořit rychlíkový turnus na dvou moderních řadách 464.2 a 477.0, a lokomotivy 464.1 se opět přesunují do společného turnusu s řadou 464.0. S postupující elektrifikací bylo umožněno tyto dvě lokomotivy přesunout do dalších dep a opět spolu přechází do Nymburka. V roce 1974 se obě natrvalo rozešly a zatím co dál 464.101 zůstává v Nymburce, 464.102 odchází do Letohradu. V roce 1976 byla 464.101 na krátkou dobu přesunuta do Havlíčkova Brodu a 17. 9. 1976 se jejím novým domovem stává Kolín. Na samém konci května 1978 došlo k jejímu poslednímu přesunu - do PLD Nymburk, kde byla 11. září 1979 zrušena.
